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豬丹毒血清學(xué)診斷技術(shù)

使用血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)方法檢出率很高，而且快速，介紹如下。（1）血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)在3％胰蛋白胨肉膏湯（或肝化湯）中，加人（1；40）一（1：80）的丹毒高免血清，同時(shí)每毫升再加入400leg卡那霉素50／lg慶大霉素及2Stag萬古霉素（缺乏抗生素時(shí)，可加0．05％疊氦鈉及o．0005％結(jié)晶紫），制成丹毒血清抗生素診斷液（如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內(nèi)可至少保存2個(gè)月）。生前取病豬耳尖血1滴，死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內(nèi)，37~C培養(yǎng)14-24h。凡管底出現(xiàn)凝集顆?；驁F(tuán)塊時(shí)即判...

豬丹毒分子生物學(xué)診斷技術(shù)

日本Okayama大學(xué)的研究者們建立了檢測(cè)豬丹毒的PCR方法（1999）。常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內(nèi)完成。它使用兩步擴(kuò)增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進(jìn)行初步擴(kuò)增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對(duì)4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非編碼區(qū)。對(duì)該簇編碼的DNA序列進(jìn)行測(cè)定，以設(shè)計(jì)種特異性PCR檢測(cè)系統(tǒng)的引物。豬紅斑丹毒絲...

純化抗體的儲(chǔ)存

純化的抗體可通過不同的途徑獲取，就本書中描述的大多數(shù)情況而言，這些抗體可通過下述方法制備或從商家購(gòu)買。從商家購(gòu)買的抗體，通常附有正確的儲(chǔ)存方法。1．經(jīng)純化制備的抗體在常用的緩沖液中是穩(wěn)定的。其DH應(yīng)保持在中性左右。如果pH在7-8之間，即使保存多年，對(duì)抗體也無損害。多數(shù)情況下，鹽濃度適于保持在0～150mmol／L之間，但在長(zhǎng)期存放的抗體中，鹽溶液濃度高達(dá)500mmol／L時(shí)，對(duì)抗體可能有損害。如果沒有其他說明．律議用PBS或50mmol／LTris（DH8．0）溶液長(zhǎng)期存放...

利用抗原柱純化抗體的常見問題

免疫親和純化技術(shù)常用于從多克隆抗體樣本中純化抗原特異性抗體。在這個(gè)過程中，純抗原共價(jià)結(jié)合于固相支持物上，多克隆混合抗體中的那些對(duì)該抗原特異的抗體能和它結(jié)合。經(jīng)過沖洗，將未結(jié)合的抗體除去，然后再將特異性抗體洗脫。這種方法不適用于單抗，因?yàn)樗鼈兣c抗原結(jié)合的活性相同。免疫親和純化技術(shù)常用于下面兩種情況。*種情況是抗肽抗體的制備。在制備抗肽抗體的過程中，要將抗肽抗體所針對(duì)的合成肽結(jié)合到載體蛋白上，以產(chǎn)生有效的免疫原性。針對(duì)肽—載體復(fù)合物的多克隆抗體產(chǎn)生后，通常并不能直接使用，而要從血...

酶聯(lián)法檢測(cè)血吸蟲抗體

[檢測(cè)方法]ELISA法[方法學(xué)原理]將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。[標(biāo)本準(zhǔn)備]不抗凝靜脈血2ml[試劑]1．日本分體血吸蟲可溶性抗原2．HRP標(biāo)記羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液4．稀釋液和洗滌液5．酶底物液6．2mol／LH25...

間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧疾

瘧疾（malaria）是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險(xiǎn)發(fā)作。常見檢測(cè)方法為間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧原蟲抗體。[檢測(cè)方法][方法學(xué)原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標(biāo)記抗人IgG抗體3．陰性對(duì)照、陽性對(duì)照血清4．抗原片[檢測(cè)步驟...

組織培養(yǎng)細(xì)胞的裂解

對(duì)于組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進(jìn)行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細(xì)胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜，破壞分子間許多微弱的結(jié)合鍵，并能溶解大部分經(jīng)常研究的蛋白質(zhì)抗原，但對(duì)于大分子多聚抗原則無效，在大多數(shù)情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補(bǔ)充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以...

利用玻璃微珠裂解酵母細(xì)胞

裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細(xì)胞一起渦旋振蕩進(jìn)行機(jī)械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉(zhuǎn)動(dòng)撞擊酵母菌從而機(jī)械破碎裂解酵母細(xì)胞。由此可見，這是一種強(qiáng)有力的裂解方法，但在裂解過程中又傳輸大量的能量，導(dǎo)致樣本的變性。因此，和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗(yàn)并不是一個(gè)好的方法，特別是研究蛋白質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)時(shí)，該方法是不可取的。1．準(zhǔn)備工作由于免疫沉淀有多個(gè)步驟，且包括數(shù)小時(shí)孵育，因此在實(shí)驗(yàn)開始前必須安排好時(shí)間，注意適當(dāng)利用過夜孵育的間隙。這將有助于決定何時(shí)開始裂解細(xì)胞。...