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在微量滴定板中進行可溶性SCFv ElISA的方法

更新時間:2012-12-22點擊次數(shù):1243

1.按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板,4℃過夜。PBS中10ug/m1的濃度是包被抗原的標準濃度。但有時需要更高的濃度或者不同的包被緩沖液(比如碳酸鹽緩沖液)。
2.棄去抗原液并用PBS洗滌板孔2次。
3.加入200gl的2%MPBS封閉每個板孔,37℃孵育2小時。
4.用PBS洗滌板孔3次。
5.每孔加入50ul的4%MPBS。
6.每孔加入50ul含可溶性抗體的培養(yǎng)基上清,用移液器反復吹吸混勻,室溫孵育1小時。
7.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
8.每孔加入100ul 9E10單抗(用2%MPBS按1:1000稀釋)。室溫孵育孔板l小時。
9.棄去溶液,用PBS/Tween洗滌板孔3次,再用PBS洗滌3次。
10.每孔加入抗小鼠HRP(用2%MPBS按1:2000稀釋)。室溫孵育孔板1小時。
11.棄去二抗,并用PBS/Tween和PBS分別洗滌3次。
12.每孔加入100ul TMB系統(tǒng)溶液,并在暗處室溫孵育10~30分鐘。數(shù)分鐘內(nèi),應(yīng)呈現(xiàn)藍色。
13.每孔加入50~100ul終止液,終止反應(yīng)。
14.在450nm處讀板。

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